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De nouveaux biomarqueurs du méconium de l'exposition prénatale à la méthamphétamine Augmentent L'identification des nouveau-nés affectés | Web Root

Les nourrissons exposés avant la naissance à la méthamphétamine (MAMP)10 sont plus susceptibles d’être petits pour leur âge gestationnel, d’avoir un poids de naissance plus faible (1) et de subir un stress physiologique accru (2). Identifier les nourrissons exposés au MAMP est impératif, non seulement pour établir des interventions médicales, comportementales et sociales, mais aussi pour caractériser les effets à long terme. Dans l’étude sur le développement, l’Environnement et le Mode de vie du nourrisson (IDÉAL), 71.0% des nouveau-nés atteints n’ont été identifiés que par la divulgation maternelle au cours de l’entretien post-partum, plutôt que par des résultats positifs aux tests de méconium; 25,2% ont été identifiés par auto-évaluation et résultats positifs au méconium, et 3,8% ont été identifiés par analyse de méconium uniquement (3).

Nous avons proposé des explications possibles pour le faible taux de détection dans le méconium. Premièrement, la plupart des femmes de l’étude IDEAL ont cessé d’utiliser le MAMP au premier ou au deuxième trimestre (3, 4). Le méconium commence à se former au deuxième trimestre, et les données de notre laboratoire et d’autres suggèrent que l’exposition au médicament au deuxième trimestre se reflète mal dans le méconium (5, 6). En effet, les échantillons de méconium étaient plus susceptibles d’être positifs lorsque la consommation de drogue de la mère se poursuivait au cours du troisième trimestre et dépassait une fois par semaine (3); pourtant, 54,3% des nouveau-nés exposés au cours du troisième trimestre avaient du méconium négatif aux amphétamines.

Deuxièmement, la procédure de test peut contribuer au faible nombre d’échantillons de méconium positifs aux amphétamines. Les échantillons de méconium ont d’abord été criblés avec la technique d’immunodosage par multiplication enzymatique (EMIT) à une limite de 500 ng/g d’amphétamines. Si les résultats étaient positifs, la présence de MAMP et d’amphétamine (AMP) a été confirmée par GC-MS. Il est possible que certains échantillons de méconium contiennent des biomarqueurs de MAMP et / ou d’AMP à des concentrations inférieures au seuil d’immunoessai. En analysant directement ces échantillons avec une procédure chromatographique avec des limites de détection améliorées, nous avons pu estimer la prévalence des résultats d’immunodosage faussement négatifs au sein de la population IDÉALE.

Enfin, près de 70% des résultats positifs dans les dépistages d’amphétamines n’ont pas été confirmés. Les tests EMIT ciblant la réaction croisée MAMP/ AMP avec d’autres amines sympathomimétiques, y compris les composants de médicaments contre le rhume en vente libre, les phénéthylamines et d’autres amphétamines illicites. De plus, des substances endogènes, d’autres composés exogènes ou des métabolites mineurs de MAMP/AMP dans le méconium peuvent produire des résultats d’immunoessai positifs. Des recherches antérieures sur la cocaïne et les cannabinoïdes ont identifié des produits métaboliques adultes relativement mineurs présents dans le méconium dans des proportions plus élevées et qui réagissent nettement lors d’immunoessais (7, 8).

Une mauvaise détection de l’exposition au MAMP a incité notre laboratoire à étudier 3 biomarqueurs alternatifs potentiels du méconium de l’exposition prénatale au MAMP : la p-hydroxyméthamphétamine (pOHMAMP), la p-hydroxyamphétamine (pOHAMP) et la noréphédrine (NOREPH) (Fig. 1). Le pOHMAMP et le NOREPH ont été trouvés dans 86,0% et 25,6%, respectivement, des échantillons de méconium positifs au MAMP non collectés dans le cadre de l’étude IDEAL; la concentration de pOHAMP était toujours inférieure à la limite de quantification (LOQ) (9). Cependant, il n’était toujours pas clair si ces nouveaux biomarqueurs augmenteraient l’identification des nourrissons exposés à la MAMP lorsque la MAMP et l’AMP n’étaient pas présentes. L’objectif principal de cette étude était de déterminer si les nouveaux métabolites de la MAMP pOHMAMP, pOHAMP et NOREPH pouvaient améliorer l’identification des nouveau-nés exposés à la MAMP et à l’AMP.

Voie métabolique de MAMP, AMP, NOREPH, pOHAMP et pOHMAMP.

Une description détaillée de l’étude IDEAL a déjà été publiée (10); le conseil d’examen institutionnel de chaque site a approuvé l’étude. Après avoir fourni un consentement écrit éclairé, les mères ont été interrogées sur la quantité et la fréquence de la MAMP, de l’Ecstasy (3,4-méthylènedioxyméthamphétamine ou MDMA) et de la consommation d’AMP pendant la grossesse.

Le méconium a été recueilli dans les couches jusqu’à l’apparition de selles de lait. Les échantillons sont restés réfrigérés jusqu’au transport de nuit aux Laboratoires d’analyse de drogues des États-Unis (à Des Plaines, IL) pour analyse. Des écrans Syva EMIT II Plus (Dade Behring / Siemens Healthcare Diagnostics) conçus pour les tests d’amphétamines urinaires ont été utilisés pour des échantillons de méconium après avoir été soumis à une homogénéisation au méthanol et à une extraction en phase solide. Si les résultats de dépistage des échantillons étaient ≥500 ng/g, l’analyse GC-MS a confirmé la présence de MAMP et d’AMP (seuil de 5 ng/g). Tous les échantillons ont été congelés à -20 ° C.

Après analyse, les échantillons de méconium ont été expédiés congelés à l’Institut national de l’abus des drogues pour une évaluation plus approfondie. Des échantillons de méconium provenant de 3 groupes de participants IDÉAUX ont été choisis: a) 48 femmes qui ont nié avoir consommé des amphétamines mais ont obtenu des résultats positifs au dépistage du méconium; b) 62 femmes qui ont déclaré avoir consommé des amphétamines mais ont obtenu des résultats négatifs au dépistage du méconium; et c) 22 femmes qui ont déclaré avoir consommé des amphétamines et ont obtenu des résultats positifs au dépistage du méconium. La réanalyse comprenait l’homogénéisation du méthanol, l’extraction en phase solide et l’analyse par chromatographie liquide –spectrométrie de masse en tandem (LC-MS/ MS) (11, 12). Les 72 premiers échantillons ont été analysés pour MAMP, AMP, pOHMAMP, pOHAMP et NOREPH; a 12.on a utilisé une limite de 5 ng/g LOQ, à l’exception de pOHMAMP, pour laquelle on a utilisé une limite de 8 ng/g (11). Les 60 échantillons restants ont été analysés avec une procédure LC-MS / MS avec des LQS inférieurs pour MAMP (2,5 ng / g), AMP (5 ng / g) et pOHMAMP (1 ng / g) (12); pOHAMP et NOREPH ont été exclus en raison de leur faible prévalence dans l’ensemble de données initial.

SPSS version 16.0 pour Windows (SPSS) et Microsoft Excel ont été utilisés pour l’analyse des données et l’évaluation statistique. Les valeurs de P < 0,05 ont été considérées comme statistiquement significatives.

Des 132 échantillons de méconium, 43 (32.6%) contenaient un ou plusieurs biomarqueurs MAMP par analyse LC-MS/MS. La plupart des échantillons testés positivement (62,7%) contenaient MAMP, AMP et pOHMAMP; MAMP et AMP n’ont été trouvés que dans 16,3% des échantillons. La MAMP et la pOHMAMP ont été identifiées dans 4,7 % des cas et la MAMP n’a été observée que dans 2,3 % des cas. Étonnamment, 6 (14,0 %) des 43 échantillons étaient positifs pour pOHMAMP sans résultats positifs pour MAMP ou AMP. pOHAMP et NOREPH ont été identifiés dans quelques échantillons et seulement lorsque MAMP et AMP étaient également présents.

Les 48 femmes qui ont nié toute consommation d’amphétamines pendant la grossesse ont eu des échantillons de méconium qui se sont révélés positifs. Les résultats de la plupart des échantillons de méconium n’ont pas été confirmés lors de la réanalyse LC-MS/MS; seuls 2 échantillons contenaient MAMP, AMP et/ou pOHMAMP, dont 1 échantillon contenant 6,2 ng/g de MAMP (tableau 1). Nous avons évalué des échantillons de méconium prélevés sur les nouveau-nés de 62 femmes ayant déclaré avoir consommé des amphétamines pendant la grossesse, mais les échantillons de méconium de leurs nourrissons étaient négatifs; 48 de ces femmes ont cessé de consommer des amphétamines au premier ou au deuxième trimestre (exposition précoce), tandis que les 14 autres femmes ont continué à subir des abus au troisième trimestre (exposition tardive). Vingt (32.3%) des 62 échantillons de méconium contenaient un ou plusieurs biomarqueurs dépassant la LC-MS/MS LOQ, dont 6 échantillons avec pOHMAMP uniquement (tableau 1). Ces 6 échantillons provenaient de 2 femmes ayant consommé des amphétamines au cours des premier et / ou deuxième trimestres et de 4 femmes ayant poursuivi leur consommation au cours du troisième trimestre. Les concentrations individuelles et totales de biomarqueurs MAMP, AMP et pOHMAMP par analyse LC-MS/ MS étaient inférieures au seuil de dosage immunologique dans 59 (95,2%) des 62 échantillons de méconium, y compris tous les échantillons de nouveau-nés exposés au début de la gestation. Parmi les 22 femmes ayant une auto-évaluation positive et des résultats positifs de dépistage du méconium, les résultats de tous les échantillons de méconium sauf 1 ont été confirmés à la fois par GC-MS et LC-MS/ MS (tableau 1).

Tableau 1

Prévalence et concentrations d’amphétamines et de métabolites dans le méconium telles que mesurées par LC-MS/ MS.

Échantillons analysés, n Positif, n (%) Médiane, ng/g Plage, ng/g
Auto-évaluation maternelle négative et résultat positif dans le dépistage par immunoessai (n = 48)
MAMP 48 2 (4.2) 2479 6.2–4952
AMPÈRE 48 1 (2.1) 1106
L-XL 48 1 (2.1) 28.9
Le Chateau 19 0 (0.0)
NOREPH 19 1 (5.3) 31.4
Auto-évaluation maternelle positive et résultat négatif dans le dépistage par immunoessai (n = 62)
MAMP 62 14 (22.6) 29.3 5.1–10370
AMPÈRE 62 12 (19.4) 23.1 5.1–1600
L-XL 62 15 (24.2) 23.0 1.3–435
Le Chateau 34 1 (2.9) 17.1
NOREPH 34 2 (5.9) 26.8 13.7–39.9
Auto-évaluation maternelle positive et résultat positif dans le dépistage par immunoessai (n = 22)
MAMP 22 21 (95.5) 1455 188-10250
AMPÈRE 22 21 (95.5) 285 20.3-1012
L-XL 22 19 (86.4) 140 27.2–402
Le Chateau 19 0
NOREPH 19 8 (42.1) 17.0 14.2–96.9

Nous avons comparé la présence de pOHMAMP et ses concentrations dans les échantillons de méconium avec les modèles maternels d’utilisation de MAMP et l’âge gestationnel estimé pour étudier les facteurs pouvant influencer la disposition de pOHMAMP. Le pOHMAMP a été identifié plus fréquemment, et il s’est produit à des concentrations plus élevées (médiane, 138 ng/g; intervalle, 3,5–345 ng/g) lorsque l’exposition s’est poursuivie au cours du troisième trimestre (23 nouveau–nés sur 34, 67,6 %) que si la consommation de drogues avait cessé plus tôt (11 nouveau-nés sur 50, 22,0 %; médiane, 23,0 ng/g; intervalle, 1,2-343 ng/g). La fréquence d’exposition n’était pas liée à la présence ou à la concentration de pOHMAMP. L’âge maternel plus jeune et la diminution du poids à la naissance étaient associés à la présence de pOHMAMP, mais n’étaient pas corrélés linéairement aux concentrations dans le méconium; des résultats similaires ont été observés pour MAMP et AMP (voir le tableau 1 dans le Supplément de données qui accompagne la version en ligne de cette brève communication à http://www.clinchem.org/content/vol56/issue5).

La surveillance de pOHAMP et de NOREPH n’a pas augmenté l’identification des nourrissons atteints; ces analytes n’ont été trouvés qu’en conjonction avec MAMP et AMP. Six nouveau-nés supplémentaires, cependant, qui avaient tous des résultats de dépistage négatifs, ont été identifiés par la seule présence de pOHMAMP dans le méconium. D’autres recherches sont nécessaires pour déterminer l’identité d’autres biomarqueurs réactifs à l’immunoessai et pour réduire la réactivité croisée de l’immunoessai avec d’autres analytes endogènes et exogènes. Moore et coll. une grande partie des échantillons de méconium testés positifs lors de l’immunoessai aux amphétamines étaient positifs pour la pseudoéphédrine ou la phényléthylamine (13).

Près de 1 nouveau-né sur 3 avec une utilisation de MAMP autodéclarée par la mère, mais les résultats de méconium négatifs à l’immunoessai ont donné des résultats positifs sur la LC-MS / MS, bien que la plupart des concentrations étaient faibles. La diminution de la concentration seuil d’immunoessai aurait peut-être permis d’identifier plus d’échantillons vrais positifs, mais étant donné le taux de confirmation déjà faible, elle aurait probablement également permis d’identifier d’autres échantillons non confirmés. Marin et coll. on a directement comparé le test EMIT (seuil de 200 ng/g) avec un test ELISA (seuil de 20 ng/g) (14). Malgré la coupure ELISA plus faible, les deux immunoessais ont montré des taux de faux positifs équivalents par rapport aux résultats des tests de confirmation chromatographiques. En cas d’abus de MAMP autodéclaré par la mère, il peut être conseillé d’effectuer des tests chromatographiques directement ou d’inclure les nouveau-nés dans le groupe exposé à la MAMP sur la base des résultats positifs des tests de méconium ou de l’auto-évaluation maternelle, comme cela a été fait dans l’étude IDEAL.

Le pOHMAMP était plus souvent présent lorsque la consommation d’amphétamines maternelles se poursuivait au troisième trimestre, mais sa présence n’était pas influencée par la fréquence d’utilisation du MAMP. On ne sait toujours pas quels autres facteurs peuvent contribuer à la formation et/ou à l’élimination de pOHMAMP. MAMP est biotransformé en AMP et pOHMAMP par le CYP2D6 (15), qui a > 70 variantes alléliques (16) et une activité accrue pendant la grossesse (17); la pharmacogénomique des participantes est inconnue. Dans l’urine, les concentrations inchangées de MAMP, d’AMP et de pOHMAMP prédominent (18, 19), similaires à la disposition dans le méconium. Le foie fœtal produit le CYP2D6 au début de la gestation (20), mais son efficacité métabolique pour le MAMP est inconnue. Des études supplémentaires sont nécessaires pour déterminer quels facteurs influencent la disposition des biomarqueurs dans le méconium.

En résumé, pOHMAMP seul a identifié d’autres nouveau-nés exposés aux amphétamines, alors que pOHAMP et NOREPH ne l’ont pas fait. Les taux de confirmation des amphétamines méconium positif à l’immunodosage n’ont pas augmenté. D’autres recherches sont nécessaires pour identifier les espèces réactives croisées qui contribuent à des résultats positifs non confirmés dans les dosages immunologiques du méconium.