Articles

A prenatális metamfetamin expozíció új Meconium biomarkerei növelik az érintett újszülöttek azonosítását | Web Root

a Metamfetaminnak (MAMP)10 prenatálisan kitett csecsemők nagyobb valószínűséggel kicsiek a terhességi korukhoz képest, alacsonyabb születési súlyuk van (1), és fokozott fiziológiai stresszt tapasztalnak (2). A MAMP-nak kitett csecsemők azonosítása elengedhetetlen, nemcsak az orvosi, viselkedési és társadalmi beavatkozások megállapításához, hanem a hosszú távú hatások jellemzéséhez is. A Csecsemőfejlődés, környezet és életmód (ideális) tanulmányban, 71.Az érintett újszülöttek 0%-át csak a szülés utáni interjú során az anya nyilvánosságra hozatala alapján azonosították, nem pedig a meconium tesztek pozitív eredményei alapján; 25,2% – ot önjelentés és pozitív meconium eredmények alapján azonosítottak, 3,8% – ot pedig csak meconium analízissel azonosítottak (3).

lehetséges magyarázatokat javasoltunk a meconium alacsony kimutatási sebességére. Először is, a legtöbb nő az ideális vizsgálatban abbahagyta a MAMP használatát az első vagy a második trimeszterben (3, 4). A Meconium a második trimeszterben kezd kialakulni, és laboratóriumunk és mások adatai azt sugallják, hogy a második trimeszter gyógyszer-expozíciója rosszul tükröződik a meconiumban (5, 6). Valójában a meconium minták nagyobb valószínűséggel mutattak pozitív eredményt, amikor az anyai MAMP kábítószer-használat folytatódott a harmadik trimeszterben, és meghaladta a heti egy alkalommal (3); mégis, a harmadik trimeszterben kitett újszülöttek 54,3%-ánál volt amfetamin-negatív meconium.

másodszor, a vizsgálati eljárás hozzájárulhat az amfetamin-pozitív meconium minták alacsony számához. A Meconium mintákat kezdetben az enzimszorzatú immunoassay technikával (EMIT) szűrtük 500 ng/g amfetamin határérték mellett. Ha az eredmények pozitívak voltak, a MAMP és az amfetamin (AMP) jelenlétét GC-MS megerősítette.lehetséges, hogy néhány meconium minta MAMP és/vagy AMP biomarkereket tartalmazott az immunoassay határértéke alatti koncentrációban. Ezeknek a mintáknak a jobb kimutatási határokkal rendelkező kromatográfiás eljárással történő közvetlen elemzésével megbecsülhetjük a hamis negatív immunvizsgálati eredmények prevalenciáját az ideális populáción belül.

végül az amfetamin-képernyők pozitív eredményeinek közel 70% – át nem erősítették meg. A MAMP/AMP-t célzó kibocsátási vizsgálatok keresztreakcióba lépnek más szimpatomimetikus aminokkal, beleértve a vény nélkül kapható hideg gyógyszeres komponenseket, fenetilaminokat és más tiltott amfetaminokat. Ezenkívül endogén anyagok, más exogén vegyületek vagy kisebb MAMP/AMP metabolitok a meconiumban pozitív immunvizsgálati eredményeket hozhatnak. A kokainnal és a kannabinoidokkal kapcsolatos korábbi kutatások viszonylag kisebb felnőtt metabolikus termékeket azonosítottak, amelyek nagyobb arányban fordulnak elő a meconiumban, és amelyek immunvizsgálatok során jelentősen keresztreakciót mutatnak (7, 8).

a MAMP expozíció gyenge kimutatása arra késztette laboratóriumunkat, hogy vizsgálja meg a prenatális MAMP expozíció 3 lehetséges alternatív meconium biomarkerét: p-hidroxi-metamfetamin (pOHMAMP), p-hidroxi-amfetamin (pOHAMP) és norefedrin (NOREF) (ábra. 1). pOHMAMP és NOREPH a MAMP-pozitív meconium minták 86,0% – ában, illetve 25,6% – ában találtak nem az ideális vizsgálat részeként; a pOHAMP-koncentráció mindig a mennyiségi meghatározási határ (LOQ) alatt volt (9). Még mindig nem volt világos, hogy ezek az új biomarkerek növelik-e a MAMP-expozíciónak kitett csecsemők azonosítását, amikor MAMP és AMP nem volt jelen. A vizsgálat elsődleges célja annak meghatározása volt, hogy az új MAMP metabolitok, a POHMAMP, a pOHAMP és a NOREPH javíthatják – e a MAMP-és AMP-expozíciónak kitett újszülöttek azonosítását.

Metabolikus út a MAMP, ERŐSÍTŐ, NOREPH, pOHAMP, valamint pOHMAMP.

az IDEAL tanulmány részletes leírását korábban közzétették (10); minden webhely intézményi felülvizsgálati testülete jóváhagyta a tanulmányt. Miután tájékozott, írásos beleegyezést adtak, az anyákat megkérdezték a MAMP, az Ecstasy (3,4-metilén-dioximetamfetamin vagy MDMA) mennyiségéről és gyakoriságáról, valamint az AMP terhesség alatti fogyasztásáról.

meconiumot gyűjtöttünk a pelenkákból a tej széklet megjelenéséig. A mintákat hűtőszekrényben tartották, amíg egy éjszakán át az Egyesült Államokba nem szállították kábítószer-vizsgáló laboratóriumok (Des Plaines, IL) elemzés céljából. A vizelet amfetamin tesztelésére tervezett Syva EMIT II Plus (Dade Behring/Siemens Healthcare Diagnostics) képernyőket meconium mintákhoz használták, miután metanol homogenizációnak és szilárd fázisú extrakciónak vetették alá őket. Ha a minták szűrési eredménye 500 ng/g volt, a GC-MS analízis megerősítette MAMP és AMP jelenlétét (5-ng/g határérték). Az összes mintát lefagyasztottuk -20-on (C).

elemzés után a meconium mintákat fagyasztva szállították az Országos kábítószer-visszaélési Intézetbe további értékelés céljából. Meconium mintákat 3 ideális résztvevő csoportból választottunk: (a) 48 nő, akik megtagadták az amfetaminok használatát, mégis pozitív eredményeket értek el a meconium képernyőn; (b) 62 nő, akik maguk jelentették be az amfetaminok használatát, mégis negatív eredményeket értek el a meconium képernyőn; és (c) 22 nő, akik maguk jelentették az amfetaminok használatát, és pozitív eredményeket értek el a meconium képernyőn. A reanalízis metanol homogenizációt, szilárdfázisú extrakciót és folyadékkromatográfiás-tandem tömegspektrometriás (LC–MS/MS) analízist tartalmazott (11, 12). Az első 72 mintát MAMP, AMP, pOHMAMP, pOHAMP és NOREPH; a 12-re elemeztük.5 ng / g LOQ határértéket használtunk, kivéve a pohmampot, amelyhez 8 ng / g határértéket használtunk (11). A fennmaradó 60 mintát LC-MS/MS eljárással elemeztük, alacsonyabb LOKQ-val MAMP (2,5 ng/g), AMP (5 ng/g) és pOHMAMP (1 ng/g) (12); a pOHAMP-ot és a NOREPH-t kizárták, mivel alacsonyak voltak prevalencia a kezdeti adatkészletben.

SPSS version 16.0 for Windows (SPSS) és Microsoft Excel használták adatelemzés és statisztikai kiértékelés. A <0, 05 P értékeket statisztikailag szignifikánsnak tekintették.

a 132 meconium minta közül 43 (32.6%) tartalmazott egy vagy több MAMP biomarkereket LC-MS/MS elemzéssel. A legtöbb pozitív vizsgálati minta (62,7%) MAMP-ot, AMP-t és pOHMAMP-ot tartalmazott; a MAMP-t és AMP-t csak a minták 16,3% – ában találták meg. A MAMP-et és a pOHMAMP-ot 4,7% – ban azonosították, míg a MAMP-ot csak 2,3% – ban figyelték meg. Meglepő módon 6 (14,0%) 43 minta pozitív volt a pOHMAMP számára, pozitív eredmények nélkül MAMP vagy AMP esetében. a pohampot és a NOREPH-t kevés mintában azonosították, és csak akkor, ha MAMP és AMP is jelen volt.

annak a 48 nőnek, akik terhesség alatt megtagadták az amfetaminok használatát, meconiummintái pozitívnak bizonyultak. A legtöbb meconium minta eredményeit az LC-MS/MS reanalízis nem erősítette meg; csak 2 minta tartalmazott MAMP-T, AMP-t és/vagy pOHMAMP-ot, beleértve 1 mintát, amely 6,2 ng/g MAMP-ot tartalmazott (1.táblázat). 62 olyan nő újszülöttjeitől származó meconiummintákat értékeltünk, akik terhesség alatt amfetaminfogyasztásról számoltak be, csecsemőik meconiummintáit azonban negatívnak szűrtük; ezek közül a nők közül 48 abbahagyta az amfetaminok használatát az első vagy a második trimeszterben (korai expozíció), míg a fennmaradó 14 nő folytatta a bántalmazást a harmadik trimeszterben (késői expozíció). Húsz (32.3%) a 62 meconiummintából egy vagy több biomarkereket tartalmazott, amelyek meghaladták az LC-MS/MS LOQ értéket, beleértve 6 mintát csak pOHMAMP-mal (1.táblázat). Ez a 6 minta 2 nőtől származott, akik amfetaminokat használtak az első és / vagy a második trimeszterben, és 4 nőtől, akik folytatták használatukat a harmadik trimeszterben. Az LC-MS/MS analízissel végzett MAMP, AMP és pOHMAMP egyéni és teljes biomarker-koncentrációk az immunoassay határértéke alatt voltak 59 (95,2%) 62 meconiummintában, beleértve a terhesség korai szakaszában kitett újszülöttektől származó összes mintát. A 22 nő közül, akiknek pozitív önjelentése és pozitív meconium-szűrési eredménye volt, a meconiumminták közül 1 kivételével az összes eredményt megerősítette mind a GC-MS, mind az LC-MS/MS (1.táblázat).

táblázat 1

az amfetaminok és metabolitok prevalenciája és koncentrációja a meconiumban, LC-MS/MS módszerrel vizsgálva.

elemzett minták, N pozitív, n (%) medián, ng / g tartomány, ng / g
negatív anyai önjelentés és pozitív eredmény immunoassay screen (n = 48)
MAMP 48 2 (4.2) 2479 6.2–4952
AMP 48 1 (2.1) 1106
pOHMAMP 48 1 (2.1) 28.9
pOHAMP 19 0 (0.0)
NOREPH 19 1 (5.3) 31.4
pozitív anyai önjelentés és negatív eredmény immunoassay screen (n = 62)
MAMP 62 14 (22.6) 29.3 5.1–10370
AMP 62 12 (19.4) 23.1 5.1–1600
pOHMAMP 62 15 (24.2) 23.0 1.3–435
pOHAMP 34 1 (2.9) 17.1
NOREPH 34 2 (5.9) 26.8 13.7–39.9
pozitív anyai önjelentés és pozitív eredmény immunoassay screen (n = 22)
MAMP 22 21 (95.5) 1455 188-10250
AMP 22 21 (95.5) 285 20.3-1012
pOHMAMP 22 19 (86.4) 140 27.2–402
pOHAMP 19 0
NOREPH 19 8 (42.1) 17.0 14.2–96.9

összehasonlítottuk a pOHMAMP jelenlétét és koncentrációját a meconium mintákban a MAMP használatának anyai mintáival és a becsült terhességi korral, hogy megvizsgáljuk a pOHMAMP diszpozícióját esetleg befolyásoló tényezőket. a pOHMAMP-ot gyakrabban azonosították, és magasabb koncentrációban fordult elő (medián, 138 ng/g; tartomány, 3,5–345 ng/g), amikor az expozíció folytatódott a harmadik trimeszterben (23 a 34 újszülöttből, 67,6%), mint ha a kábítószer–használat korábban leállt volna (11 az 50 újszülöttből, 22,0%; medián, 23,0 ng/g; tartomány, 1,2-343 ng/g). Az expozíció gyakorisága nem volt összefüggésben a pOHMAMP jelenlétével vagy koncentrációjával. A fiatalabb anyai életkor és a csökkent születési súly összefüggésbe hozható a pOHMAMP jelenlétével, de nem voltak lineárisan korrelálva a meconium koncentrációival; hasonló eredményeket figyeltek meg MAMP és AMP esetében is (lásd a rövid közlemény online változatát kísérő Adatkiegészítés 1.táblázatát a http://www.clinchem.org/content/vol56/issue5címen).

a pOHAMP és a NOREPH monitorozása nem növelte az érintett csecsemők azonosítását; ezeket az elemzéseket csak MAMP-vel és AMP-vel együtt találták. Hat további újszülött, azonban, akiknek negatív szűrési eredményei voltak, csak pOHMAMP jelenlétével azonosították meconium. További kutatásokra van szükség az egyéb immunoassay-reaktív biomarkerek azonosításának meghatározásához és az immunoassay keresztreaktivitásának csökkentéséhez más endogén és exogén analitokkal. Moore et al. az amfetaminok immunvizsgálatában pozitívnak bizonyult meconium minták nagy részét pszeudoefedrinre vagy feniletilaminra pozitívnak találta (13).

közel 1 a 3 újszülöttből, akiknek anyai saját bevallása szerint MAMP-t használtak, de az immunoassay-negatív meconium eredmények pozitív LC-MS/MS eredményeket mutattak, bár a legtöbb koncentráció alacsony volt. Az immunoassay határkoncentrációjának csökkentése több igaz pozitív mintát azonosíthatott volna, de tekintettel az amúgy is alacsony megerősítési arányra, valószínűleg további megerősítetlen mintákat is azonosított. Marin et al. közvetlenül összehasonlította az EMIT vizsgálatot (200 ng/g határérték) egy ELISA-val (20 ng/g határérték) (14). Az alacsonyabb ELISA határérték ellenére mindkét immunvizsgálat egyenértékű hamis pozitív arányt mutatott a kromatográfiás megerősítő tesztek eredményeivel összehasonlítva. Anyai önbevallás esetén MAMP visszaélés, tanácsos lehet közvetlenül elvégezni a kromatográfiás vizsgálatot, vagy újszülötteket bevonni a MAMP-expozíciós csoportba a meconium-tesztek pozitív eredményei vagy az anyai önjelentés alapján, amint azt az ideális vizsgálatban tették.

a pOHMAMP gyakrabban volt jelen, amikor az anyai amfetaminfogyasztás folytatódott a harmadik trimeszterben, de jelenlétét nem befolyásolta a MAMP használatának gyakorisága. Még mindig nem világos, hogy milyen egyéb tényezők járulhatnak hozzá a pOHMAMP kialakulásához és / vagy diszpozíciójához. A MAMP biotranszformálódik AMP – vé és pOHMAMP – vá a CYP2D6 (15) által, amelynek >70 allélváltozata van (16) és fokozott aktivitása van a terhesség alatt (17); a résztvevők farmakogenomikája nem ismert. A vizeletben változatlan MAMP, AMP és pOHMAMP koncentrációk dominálnak (18, 19), hasonlóan a meconium diszpozíciójához. A magzati máj a terhesség korai szakaszában CYP2D6-ot termel (20), de a MAMP metabolikus hatékonysága ismeretlen. További vizsgálatokra van szükség annak tisztázásához, hogy mely tényezők befolyásolják a biomarker diszpozícióját a meconiumban.

összefoglalva, pOHMAMP egyedül azonosított további amfetaminoknak kitett újszülötteket, míg pOHAMP és NOREPH nem. Az amfetaminok immunoassay–pozitív meconium megerősítési aránya nem nőtt. További kutatásokra van szükség a keresztreaktív Fajok azonosításához, amelyek hozzájárulnak a meconium immunvizsgálatainak megerősítetlen pozitív eredményeihez.