Articles

Metamfetamiinille ennen synnytystä altistuneiden vastasyntyneiden | Web Root

ennen synnytystä Metamfetamiinille (MAMP)altistuneiden imeväisten tunnistaminen on todennäköisempää, että he ovat pieniä raskausikään nähden, heillä on pienempi syntymäpaino (1) ja he kokevat lisääntynyttä fysiologista stressiä (2). MAMP-altistuneiden imeväisten tunnistaminen on välttämätöntä, ei vain lääketieteellisten, käyttäytymiseen liittyvien ja sosiaalisten interventioiden määrittämiseksi, vaan myös pitkän aikavälin vaikutusten luonnehtimiseksi. In the Infant Development, Environment, and Lifestyle (IDEAL) study, 71.Tartunnan saaneista vastasyntyneistä 0 prosenttia tunnistettiin vain äidin synnytyksen jälkeisessä haastattelussa eikä mekoniumtestien positiivisten tulosten perusteella; 25,2 prosenttia tunnistettiin omailmoituksella ja positiivisilla mekoniumtuloksilla ja 3,8 prosenttia pelkästään mekoniumanalyysillä (3).

ehdotimme mahdollisia selityksiä mekoniumin alhaiselle havaitsemisnopeudelle. Ensinnäkin useimmat IHANNETUTKIMUKSESSA olleet naiset lopettivat MAMPIN käytön ensimmäisen tai toisen raskauskolmanneksen aikana (3, 4). Mekonium alkaa muodostua toisen kolmanneksen aikana, ja laboratoriomme ja muut tiedot viittaavat siihen, että toisen kolmanneksen lääkealtistus heijastuu huonosti mekoniumiin (5, 6). Mekoniumnäytteiden positiivisuus oli todennäköisempää, kun äidin MAMP-huumeidenkäyttö jatkui kolmannelle kolmannekselle ja lisääntyi kerran viikossa (3); kuitenkin 54,3 prosentilla vastasyntyneistä, jotka altistuivat kolmannen kolmanneksen aikana, oli amfetamiininegatiivinen mekonium.

toiseksi testausmenettely voi osaltaan vaikuttaa amfetamiinipositiivisten mekoniumnäytteiden vähäiseen määrään. Mekoniumnäytteet seulottiin aluksi entsyymikertaistetulla immunomääritysmenetelmällä (EMIT), jossa amfetamiinien raja-arvo oli 500 ng/g. Jos tulokset olivat positiivisia, GC-MS vahvisti MAMP: n ja amfetamiinin (AMP) esiintymisen.on mahdollista, että jotkin mekoniumnäytteet sisälsivät MAMP: n ja/tai AMP: n biomarkkereita immunomäärityksen raja-arvon alapuolella. Analysoimalla suoraan näitä näytteitä kromatografisella menetelmällä, jossa on paremmat havaitsemisrajat, voisimme arvioida väärien negatiivisten immunomääritystulosten esiintyvyyden IHANNEPOPULAATIOSSA.

lopulta lähes 70 prosenttia amfetamiininäyttöjen positiivisista tuloksista jäi vahvistamatta. Emittoi määrityksiä, joiden kohteena on MAMP/AMP-ristireaktio muiden sympatomimeettisten amiinien kanssa, mukaan lukien käsikauppalääkityskomponentit, fenetyyliamiinit ja muut laittomat amfetamiinit. Lisäksi mekoniumissa olevat endogeeniset aineet, muut eksogeeniset yhdisteet tai vähäiset MAMP/AMP-metaboliitit voivat tuottaa positiivisia immunomääritystuloksia. Aiemmissa kokaiinia ja kannabinoideja koskevissa tutkimuksissa havaittiin suhteellisen vähäisiä aikuisten aineenvaihduntatuotteita, joita esiintyy mekoniumissa suuremmissa määrin ja jotka ristireagoivat merkittävästi immunomäärityksissä (7, 8).

MAMP-altistuksen huono havaitseminen sai laboratoriomme tutkimaan 3 mahdollista vaihtoehtoista mekoniumbiomarkkeria raskausmamp-altistukselle: P-hydroksimetamfetamiini (pOHMAMP), P-hydroksiamfetamiini (pOHAMP) ja norefedriini (NOREPH) (Kuva. 1). pOHMAMP ja NOREPH löydettiin 86, 0% MAMP-positiivisista mekoniumnäytteistä, joita ei kerätty IDEAALITUTKIMUKSEN yhteydessä, ja 25, 6% MAMP-positiivisista mekoniumnäytteistä.; pOHAMP-pitoisuus oli aina alle määritysrajan (LOQ) (9). Vielä ei kuitenkaan ollut selvää, lisäisivätkö nämä uudet biomarkkerit MAMPILLE altistuneiden pikkulasten tunnistamista, kun MAMPIA ja AMP: tä ei ollut. Tämän tutkimuksen ensisijaisena tavoitteena oli selvittää, voisivatko uudet MAMP-metaboliitit pOHMAMP, pOHAMP ja NOREPH parantaa MAMP-ja AMP-altistuneiden vastasyntyneiden tunnistamista.

metabolinen polku MAMP, AMP, NOREPH, pOHAMP, ja pOHMAMP.

IDEAALITUTKIMUKSESTA on aiemmin julkaistu yksityiskohtainen kuvaus (10); kunkin laitoksen institutionaalinen tarkastuslautakunta hyväksyi tutkimuksen. Kun äidit olivat antaneet tietoon perustuvan, kirjallisen suostumuksen, heitä haastateltiin MAMP: n, ekstaasin (3,4-metyleenidioksimetamfetamiinin eli MDMA: n) määrästä ja esiintymistiheydestä sekä AMP: n käytöstä raskauden aikana.

mekoniumia kerättiin vaipoista maitojakkaran ilmaantumiseen asti. Näytteet säilyivät kylmässä, kunnes ne kuljetettiin yön yli Yhdysvaltojen Huumetestauslaboratorioihin (Des Plaines, IL) analysoitaviksi. Syva EMIT II Plus (Dade Behring/Siemens Healthcare Diagnostics)-seuloja, jotka on suunniteltu virtsan amfetamiinitestaukseen, käytettiin mekoniumnäytteisiin sen jälkeen, kun niistä oli tehty metanolihomogenisointi ja kiinteäfaasiuutto. Jos näytteiden seulontatulokset olivat ≥500 ng/g, GC-MS-analyysi vahvisti MAMP: n ja AMP: n esiintymisen (5-ng / g cutoff). Kaikki näytteet pakastettiin -20 °C: ssa.

analyysin jälkeen mekoniumnäytteet toimitettiin pakastettuina National Institute on Drug Abuse-laitokselle jatkoarviointia varten. Mekonium-näytteitä valittiin 3 ideaalisesta osallistujaryhmästä: a) 48 naista, jotka kielsivät amfetamiinien käytön mutta saivat positiivisen tuloksen mekoniumseulonnassa; B) 62 naista, jotka itse ilmoittivat amfetamiinien käytöstä mutta saivat negatiivisen tuloksen mekoniumseulonnassa; ja c) 22 naista, jotka itse ilmoittivat amfetamiinien käytöstä ja saivat positiivisen tuloksen mekoniumseulonnassa. Reanalyysi sisälsi metanolihomogenisoinnin, kiinteäfaasiuuttamisen ja nestekromatografia–tandem-massaspektrometrian (LC-MS/MS) analyysin (11, 12). Ensimmäiset 72 näytettä analysoitiin MAMP, AMP, pOHMAMP, pOHAMP, ja NOREPH; a 12.5-ng/g LOQ-raja-arvoa käytettiin paitsi pohmampissa, jossa käytettiin 8-ng/g-raja-arvoa (11). Loput 60 näytettä analysoitiin LC-MS / MS-menetelmällä, jossa MAMP: n (2,5 ng/g), AMP: n (5 ng/g) ja pOHMAMP: n (1 ng/g) (12) LOQ: t olivat alhaisemmat; pOHAMP ja NOREPH jätettiin pois, koska niiden esiintyvyys alustavissa tiedoissa oli vähäinen.

SPSS: n versiota 16.0 Windowsille (SPSS) ja Microsoft Exceliä käytettiin tietojen analysointiin ja tilastolliseen arviointiin. P-arvoja <0, 05 pidettiin tilastollisesti merkitsevinä.

132 mekoniumnäytteestä 43 (32.6%) sisälsi yhden tai useamman MAMP-biomarkkerin LC-MS/MS-analyysin perusteella. Useimmat positiivisesti testatut näytteet (62,7%) sisälsivät MAMP, AMP, ja pOHMAMP; MAMP ja AMP löytyi vain 16,3% näytteistä. MAMP ja pOHMAMP tunnistettiin 4,7%: lla ja MAMP havaittiin vain 2,3%: lla. Yllättäen 6 (14,0%) 43 näytteestä oli positiivisia pohmampille ilman positiivisia tuloksia MAMPILLE tai AMP: lle. pOHAMP ja NOREPH tunnistettiin muutamissa näytteissä ja vasta, kun MAMP ja AMP olivat myös läsnä.

niillä 48 naisella, jotka kielsivät kaiken amfetamiinin käytön raskauden aikana, oli mekoniumnäytteet, jotka seulottiin positiivisiksi. Useimpien mekoniumnäytteiden tuloksia ei vahvistettu LC-MS/MS-uudelleenanalyysissä; vain 2 näytettä sisälsi MAMP -, AMP-ja/tai pOHMAMP-näytettä, joista 1 näyte sisälsi 6, 2 ng/g MAMP-näytettä (Taulukko 1). Arvioimme mekoniumnäytteitä vastasyntyneiltä 62 naiselta, jotka ilmoittivat käyttäneensä amfetamiinia raskauden aikana, mutta heidän vauvojensa mekoniumnäytteet seulottiin negatiivisiksi; näistä naisista 48 lopetti amfetamiinien käytön ensimmäisellä tai toisella kolmanneksella (varhainen altistus), kun taas loput 14 naista jatkoivat väärinkäyttöä kolmannekselle (myöhäinen altistus). Twenty (32.3%) 62 mekoniumnäytteestä sisälsi yhden tai useamman biomarkkerin, jotka ylittivät LC-MS / MS LOQ-arvon, mukaan lukien 6 näytettä, joissa oli vain pOHMAMP (Taulukko 1). Nämä 6 näytettä olivat 2 naiselta, jotka käyttivät amfetamiinia ensimmäisen ja/tai toisen kolmanneksen aikana, ja 4 naiselta, jotka jatkoivat amfetamiinia kolmannelle kolmannekselle. MAMP -, AMP-ja pOHMAMP-yksilö-ja kokonaisbiomarkkeripitoisuudet LC-MS/MS-analyysissä alittivat immunomäärityksen raja-arvon 59: ssä (95,2%) 62 mekoniumnäytteestä, mukaan lukien kaikki raskauden alkuvaiheessa altistuneiden vastasyntyneiden näytteet. Niistä 22 naisesta, joilla oli positiivinen omailmoitus ja positiivinen mekoniumseulontatulos, kaikkien mekoniumnäytteiden tulokset yhtä lukuun ottamatta vahvistettiin sekä GC-MS: llä että LC-MS/MS: llä (Taulukko 1).

Taulukko 1

amfetamiinien ja metaboliittien prevalenssi ja pitoisuudet mekoniumissa, määritettynä LC-MS/MS-menetelmällä.

analysoidut näytteet, n positiivinen, n (%) mediaani, ng / g vaihteluväli, ng / g
negatiivinen äidin omailmoitus ja positiivinen tulos immunomääritysseulonnassa (n = 48)
Äiti. 48 2 (4.2) 2479 6.2–4952
AMP 48 1 (2.1) 1106
pOHMAMP 48 1 (2.1) 28.9
pOHAMP 19 0 (0.0)
NOREPH 19 1 (5.3) 31.4
positiivinen äidin omailmoitus ja negatiivinen tulos immunomäärityksessä (n = 62)
Äiti. 62 14 (22.6) 29.3 5.1–10370
AMP 62 12 (19.4) 23.1 5.1–1600
pOHMAMP 62 15 (24.2) 23.0 1.3–435
pOHAMP 34 1 (2.9) 17.1
NOREPH 34 2 (5.9) 26.8 13.7–39.9
positiivinen äidin omailmoitus ja positiivinen tulos immunomääritysseulonnassa (n = 22)
Äiti. 22 21 (95.5) 1455 188-10250
AMP 22 21 (95.5) 285 20.3-1012
pOHMAMP 22 19 (86.4) 140 27.2–402
pOHAMP 19 0
NOREPH 19 8 (42.1) 17.0 14.2–96.9

vertasimme pohmampin esiintymistä ja sen pitoisuuksia mekoniumnäytteissä äidin MAMP – käytön kuvioihin ja arvioituun raskausikään tutkiaksemme pohmampin dispositioon mahdollisesti vaikuttavia tekijöitä. pOHMAMP todettiin useammin ja sitä esiintyi suuremmilla pitoisuuksilla (mediaani 138 ng/g; vaihteluväli 3, 5–345 ng/g), kun altistus jatkui kolmannekselle (23 vastasyntynyttä 34: stä, 67, 6%) kuin jos huumeidenkäyttö lopetettiin aikaisemmin (11 vastasyntynyttä 50: stä, 22, 0%; mediaani 23, 0 ng/g; vaihteluväli 1, 2–343 ng/g). Altistustiheys ei ollut yhteydessä pohmampin esiintymiseen tai pitoisuuteen. Äidin nuoremmalla iällä ja syntymäpainon laskulla oli yhteys pohmampin esiintymiseen, mutta ne eivät korreloineet lineaarisesti mekonium-pitoisuuksien kanssa.; samansuuntaisia tuloksia saatiin MAMP: n ja AMP: n osalta (ks.Taulukko 1 Tämän lyhyen tiedonannon verkkoversioon liitetyssä Dataliitteessä http://www.clinchem.org/content/vol56/issue5).

pohampin ja NOREPHIN seuranta ei lisännyt sairastuneiden imeväisten tunnistamista; näitä analyyttejä löydettiin vain yhdessä MAMPIN ja AMP: n kanssa. Kuusi muuta vastasyntynyttä, joilla kaikilla oli negatiivinen seulontatulos, tunnistettiin kuitenkin vain pohmampin esiintymisestä mekoniumissa. Lisätutkimuksia tarvitaan, jotta voidaan määrittää muiden immunomääritykseen reagoivien biomarkkereiden identiteetti ja vähentää immunomäärityksen ristireaktiivisuutta muiden endogeenisten ja eksogeenisten analyyttien kanssa. Moore ym. todettiin, että suuri osa mekoniumnäytteistä, jotka olivat positiivisia amfetamiinien immunomäärityksessä, oli pseudoefedriiniä tai fenyylietyyliamiinia (13).

lähes joka kolmannella vastasyntyneellä, joilla oli äidin itse ilmoittama MAMP-käyttö, mutta immunomääritysnegatiiviset mekoniumtulokset olivat positiivisia LC-MS / MS-tuloksia, vaikka suurin osa pitoisuuksista oli pieniä. Immunomäärityksen cutoff-pitoisuuden pienentäminen olisi saattanut tunnistaa enemmän tosi-positiivisia näytteitä, mutta koska varmistusaste on jo alhainen, se olisi todennäköisesti tunnistanut myös muita vahvistamattomia näytteitä. Marin ym. verrattiin suoraan EMIT-määritystä (200-ng/g cutoff) Elisa-määritykseen (20-ng/g cutoff) (14). Pienemmästä Elisa-raja-arvosta huolimatta molemmissa immunomäärityksissä havaittiin saman verran vääriä positiivisia tuloksia verrattuna kromatografisten varmistustestien tuloksiin. Äidin itse ilmoittamien MAMPIN väärinkäytön tapauksessa voi olla suositeltavaa tehdä kromatografinen testi suoraan tai sisällyttää vastasyntyneet MAMPILLE altistuneeseen ryhmään mekoniumtestien positiivisten tulosten tai äidin omailmoituksen perusteella, kuten IDEAALITUTKIMUKSESSA tehtiin.

pohmampia esiintyi useammin äidin amfetamiinien käytön jatkuessa kolmannekselle saakka, mutta äidin käytön yleisyys ei vaikuttanut sen esiintymiseen. Vielä ei ole selvää, mitkä muut tekijät voivat vaikuttaa pOHMAMP muodostumista ja/tai disposition. MAMP biotransformoituu AMP: ksi ja pOHMAMP: ksi CYP2D6: n (15) vaikutuksesta, jolla on >70 alleelivarianttia (16) ja lisääntynyt aktiivisuus raskauden aikana (17); osallistujien farmakogenomiikka ei ole tiedossa. Virtsassa, muuttumaton MAMP, AMP, ja pOHMAMP pitoisuudet vallitseva (18, 19), samanlainen disposition mekonium. Sikiön maksa tuottaa CYP2D6-entsyymiä raskauden alkuvaiheessa (20), mutta sen metabolista tehokkuutta MAMPILLE ei tunneta. Lisätutkimukset ovat tarpeen sen selvittämiseksi, mitkä tekijät vaikuttavat biomarkkerin jakautumiseen mekoniumissa.

yhteenvetona voidaan todeta, että pOHMAMP havaitsi yksin muita amfetamiinille altistuneita vastasyntyneitä, kun taas pOHAMP ja NOREPH eivät. Amfetamiinien immunomääritys-positiivinen mekonium ei lisääntynyt. Lisätutkimuksia tarvitaan sellaisten ristiinreaktiivisten lajien tunnistamiseksi, jotka vaikuttavat vahvistamattomiin positiivisiin tuloksiin mekoniumin immunomäärityksissä.