Articles

Nye Meconiumbiomarkører af prænatal Metamfetamineksponering øger identifikationen af berørte nyfødte | Web Root

spædbørn, der prenatalt udsættes for metamfetamin (MAMP)10, er mere tilbøjelige til at være små i deres svangerskabsalder, har lavere fødselsvægt (1) og oplever øget fysiologisk stress (2). Det er bydende nødvendigt at identificere MAMP-udsatte spædbørn, ikke kun for at etablere medicinske, adfærdsmæssige og sociale indgreb, men også for at karakterisere langtidseffekter. I spædbarns udvikling, miljø og livsstil (IDEAL) undersøgelse, 71.0% af de berørte nyfødte blev kun identificeret gennem moderens afsløring under postpartumintervjuet snarere end fra positive resultater i meconiumtest; 25,2% blev identificeret ved selvrapport og positive meconiumresultater, og 3,8% blev kun identificeret ved meconiumanalyse (3).

vi foreslog mulige forklaringer på den lave detektionshastighed i meconium. For det første stoppede de fleste kvinder i den ideelle undersøgelse MAMP-brug i første eller anden trimester (3, 4). Meconium begynder at danne i andet trimester, og data fra vores laboratorium og andre tyder på, at anden trimester lægemiddeleksponering er dårligt afspejlet i meconium (5, 6). Faktisk var meconiumprøver mere tilbøjelige til at teste positive, når maternel MAMP-stofbrug fortsatte ind i tredje trimester og oversteg en gang om ugen (3); alligevel havde 54,3% af nyfødte, der blev udsat i tredje trimester, amfetamin-negativt meconium.

for det andet kan testproceduren bidrage til det lave antal amfetamin-positive meconiumprøver. Meconiumprøver blev oprindeligt screenet med den multiplicerede immunoassay-teknik (EMIT) ved en amfetaminafbrydelse på 500 ng/g. Hvis resultaterne var positive, blev tilstedeværelsen af MAMP og amfetamin (AMP) bekræftet af GC-MS. Det er muligt, at nogle meconiumprøver indeholdt MAMP og/eller AMP biomarkører i koncentrationer under immunoassay cutoff. Ved direkte at analysere disse prøver med en kromatografisk procedure med forbedrede detektionsgrænser kunne vi estimere forekomsten af falsk-negative immunoassayresultater inden for den ideelle population.

endelig blev næsten 70% af de positive resultater i amfetaminskærme ikke bekræftet. EMIT assays rettet mod MAMP / AMP krydsreagerer med andre sympatomimetiske aminer, herunder over-the-counter koldmedicinske komponenter, phenethylaminer og andre ulovlige amfetaminer. Derudover kan endogene stoffer, andre eksogene forbindelser eller mindre MAMP/AMP-metabolitter i meconium give positive immunoassayresultater. Tidligere forskning på kokain og cannabinoider identificerede relativt mindre voksne metaboliske produkter, der forekommer i meconium i højere proportioner, og som markant krydsreagerer i immunoassays (7, 8).

dårlig påvisning af MAMP-eksponering fik vores laboratorium til at undersøge 3 potentielle alternative meconiumbiomarkører for prenatal MAMP-eksponering: p-hydroksymetamfetamin (pOHMAMP), p-hydroksyamfetamin (pOHAMP) og norephedrin (NOREPH) (Fig. 1). pOHMAMP og NOREPH blev fundet i henholdsvis 86,0% og 25,6% af MAMP-positive meconiumprøver, der ikke blev indsamlet som en del af den ideelle undersøgelse; pOHAMP-koncentrationen var altid under kvantificeringsgrænsen (9). Det var stadig ikke klart, imidlertid, om disse nye biomarkører ville øge identifikationen af MAMP-eksponerede spædbørn, når MAMP og AMP ikke var til stede. Det primære mål med denne undersøgelse var at bestemme, om de nye MAMP – metabolitter pOHMAMP, pOHAMP og NOREPH kunne forbedre identifikationen af MAMP-og AMP-eksponerede nyfødte.

metabolsk vej af MAMP, AMP, NOREPH, pOHAMP og pOHMAMP.

en detaljeret beskrivelse af den ideelle undersøgelse er tidligere blevet offentliggjort (10); hvert steds institutionelle gennemgangsudvalg godkendte undersøgelsen. Efter at have givet informeret, skriftligt samtykke blev mødre afhørt om mængden og hyppigheden af MAMP, Ecstasy (3,4-methylendioksimetamfetamin eller MDMA) og AMP-forbrug under graviditet.

Meconium blev opsamlet fra bleer indtil udseendet af mælkeafføring. Prøver forblev nedkølet indtil natten transport til USA Drug Testing Laboratories (i Des Plaines, IL) til analyse. Syva EMIT II Plus (Dade Behring/Siemens Healthcare Diagnostics) skærme designet til test af amfetamin i urin blev brugt til meconiumprøver, efter at de var blevet udsat for methanolhomogenisering og ekstraktion i fast fase. Hvis prøverne havde screeningsresultater på 500 ng / g, bekræftede GC-MS-analyse tilstedeværelsen af MAMP og AMP (5-ng/g cutoff). Alle prøver blev frosset ved -20 liter C.

efter analyse blev meconiumprøver sendt frosset til National Institute on Drug Abuse til yderligere evaluering. Meconiumprøver fra 3 ideelle deltagergrupper blev valgt: a) 48 kvinder, der nægtede brug af amfetamin, havde endnu positive resultater i meconiumskærmen; b) 62 kvinder, der selvrapporterede amfetaminbrug, havde endnu negative resultater i meconiumskærmen; og c) 22 kvinder, der selvrapporterede amfetaminbrug, og havde positive resultater i meconiumskærmen. Reanalyse omfattede metanolhomogenisering, fastfaseekstraktion og væskekromatografi–tandem massespektrometri (LC-MS/MS) analyse (11, 12). De første 72 prøver blev analyseret for MAMP, AMP, pOHMAMP, pOHAMP og NOREPH; – en 12.5-ng / g LOKEAFSKÆRING blev brugt undtagen pOHMAMP, for hvilken der blev anvendt en 8-ng/g cutoff (11). De resterende 60 prøver blev analyseret med en LC-MS/MS-procedure med lavere lokaliteter for MAMP (2,5 ng/g), AMP (5 ng/g) og pOHMAMP (1 ng/g) (12); pOHAMP og NOREPH blev udelukket på grund af deres lave prævalens i det oprindelige datasæt.

SPSS version 16.0 blev brugt til dataanalyse og statistisk evaluering. P-værdier < 0,05 blev betragtet som statistisk signifikante.

af de 132 meconiumprøver, 43 (32.6%) indeholdt en eller flere MAMP-biomarkører ved LC-MS/MS-analyse. De fleste positive testprøver (62,7%) indeholdt MAMP, AMP og pOHMAMP; MAMP og AMP blev kun fundet i 16,3% af prøverne. MAMP og pOHMAMP blev identificeret hos 4,7%, og MAMP blev kun observeret hos 2,3%. Overraskende var 6 (14,0%) af 43 prøver positive for pOHMAMP uden positive resultater for MAMP eller AMP. pOHAMP og NOREPH blev identificeret i få prøver, og kun når MAMP og AMP også var til stede.

de 48 kvinder, der nægtede amfetaminbrug under graviditet, havde meconiumprøver, der blev screenet som positive. Resultaterne for de fleste meconiumprøver blev ikke bekræftet i LC-MS/MS-reanalysen; kun 2 prøver indeholdt MAMP, AMP og/eller pOHMAMP, inklusive 1 prøve indeholdende 6,2 ng/g MAMP (tabel 1). Vi evaluerede meconiumprøver fra nyfødte af 62 kvinder, der rapporterede amfetaminforbrug under graviditet, men deres spædbørns meconiumprøver blev screenet som negative; 48 af disse kvinder stoppede amfetaminbrug i første eller andet trimester (tidlig eksponering), mens de resterende 14 kvinder fortsatte misbrug i tredje trimester (sen eksponering). Tyve (32.3%) af de 62 meconiumprøver indeholdt en eller flere biomarkører, der oversteg LC-MS/MS-lokummet, herunder kun 6 prøver med pOHMAMP (tabel 1). Disse 6 prøver var fra 2 kvinder, der brugte amfetamin i første og/eller andet trimester og 4 kvinder, der fortsatte deres anvendelse i tredje trimester. MAMP, AMP og pOHMAMP individuelle og samlede biomarkørkoncentrationer ved LC-MS/MS-analyse var under immunassay cutoff i 59 (95,2%) af 62 meconiumprøver, inklusive alle prøver fra nyfødte eksponeret tidligt i drægtighedsperioden. Blandt de 22 kvinder med en positiv selvrapport og positive meconium-screeningsresultater blev resultaterne af alle undtagen 1 af meconiumprøverne bekræftet af både GC-MS og LC-MS/MS (tabel 1).

tabel 1

prævalens og koncentrationer af amfetamin og metabolitter i meconium som analyseret af LC-MS/MS.

analyserede prøver, N Positive, n (%) Median, ng / g interval, ng / g
negativ maternel selvrapport og positivt resultat i immunoassay-skærm (n = 48)
MAMP 48 2 (4.2) 2479 6.2–4952
AMP 48 1 (2.1) 1106
pOHMAMP 48 1 (2.1) 28.9
pOHAMP 19 0 (0.0)
NOREPH 19 1 (5.3) 31.4
positiv maternel selvrapport og negativt resultat i immunoassay-skærm (n = 62)
MAMP 62 14 (22.6) 29.3 5.1–10370
AMP 62 12 (19.4) 23.1 5.1–1600
pOHMAMP 62 15 (24.2) 23.0 1.3–435
pOHAMP 34 1 (2.9) 17.1
NOREPH 34 2 (5.9) 26.8 13.7–39.9
positiv maternel selvrapport og positivt resultat i immunoassay-skærm (n = 22)
MAMP 22 21 (95.5) 1455 188-10250
AMP 22 21 (95.5) 285 20.3-1012
pOHMAMP 22 19 (86.4) 140 27.2–402
pOHAMP 19 0
NOREPH 19 8 (42.1) 17.0 14.2–96.9

vi sammenlignede pOHMAMP-tilstedeværelse og dens koncentrationer i meconiumprøver med modermønstre for MAMP-brug og estimeret svangerskabsalder for at undersøge faktorer, der muligvis påvirker pohmamp-disposition. pOHMAMP blev identificeret hyppigere, og det forekom ved højere koncentrationer (median, 138 ng/g; interval, 3,5–345 ng/g), når eksponeringen fortsatte ind i tredje trimester (23 ud af 34 nyfødte, 67,6%), end hvis stofbrug stoppede tidligere (11 ud af 50 nyfødte, 22,0%; median, 23,0 ng/g; interval, 1,2–343 ng/g). Eksponeringsfrekvensen var ikke relateret til pohmamps tilstedeværelse eller koncentration. Yngre moderalder og nedsat fødselsvægt var forbundet med pOHMAMP-tilstedeværelse, men var ikke lineært korreleret med koncentrationer i meconium; lignende resultater blev observeret for MAMP og AMP (Se tabel 1 i Datatillægget, der ledsager onlineversionen af denne korte meddelelse på http://www.clinchem.org/content/vol56/issue5).

overvågning af pOHAMP og NOREPH øgede ikke identifikationen af berørte spædbørn; disse analytter blev kun fundet i forbindelse med MAMP og AMP. Seks yderligere nyfødte, imidlertid, som alle havde negative screeningsresultater, blev identificeret ved kun pOHMAMP-tilstedeværelse i meconium. Yderligere forskning er nødvendig for at bestemme identiteten af andre immunoassay-reaktive biomarkører og for at reducere immunoassayets krydsreaktivitet med andre endogene og eksogene analytter. Moore et al. identificerede en stor del af meconiumprøver, der testede positive i amfetaminimmunanalysen, som positive for pseudoephedrin eller phenylethylamin (13).

næsten 1 ud af 3 nyfødte med maternel selvrapporteret MAMP-brug, men immunoassay-negative meconiumresultater havde positive LC-MS/MS-resultater, skønt de fleste af koncentrationerne var lave. Reduktion af immunoassay cutoff-koncentrationen kunne have identificeret mere sandt positive prøver, men i betragtning af den allerede lave bekræftelsesrate ville det sandsynligvis også have identificeret yderligere ubekræftede prøver. Marin et al. direkte sammenlignet EMIT-analysen (200-ng/g cutoff) med en ELISA (20-ng/g cutoff) (14). På trods af den lavere Elisa-cutoff viste begge immunoassays ækvivalente falsk-positive hastigheder sammenlignet med resultaterne af kromatografiske bekræftelsestest. I tilfælde af moderens selvrapporterede MAMP-misbrug kan det være tilrådeligt at udføre kromatografisk test direkte eller at inkludere nyfødte i den MAMP-eksponerede gruppe på grundlag af positive resultater i meconiumtest eller moderens selvrapport, som det blev gjort i IDEAL-undersøgelsen.

pOHMAMP var oftere til stede, når moderens amfetaminforbrug fortsatte ind i tredje trimester, men dets tilstedeværelse blev ikke påvirket af hyppigheden af MAMP-brug. Det er stadig ikke klart, hvilke andre faktorer der kan bidrage til pOHMAMP-dannelse og/eller disposition. MAMP biotransformeres til AMP og pOHMAMP af CYP2D6 (15), som har >70 allelvarianter (16) og øget aktivitet under graviditet (17); deltagernes farmakogenomik er ukendt. I urin dominerer uændrede MAMP -, AMP-og pOHMAMP-koncentrationer (18, 19), svarende til dispositionen i meconium. Føtal lever producerer CYP2D6 tidligt i svangerskabet (20), men dets metaboliske effektivitet for MAMP er ukendt. Yderligere undersøgelser er nødvendige for at belyse, hvilke faktorer der påvirker biomarkør disposition i meconium.

sammenfattende identificerede pOHMAMP alene yderligere amfetamineksponerede nyfødte, mens pOHAMP og NOREPH ikke gjorde det. Bekræftelsesgraden for amfetamin immunoassay-positiv meconium steg ikke. Yderligere forskning er nødvendig for at identificere krydsreaktive arter, der bidrager til ubekræftede positive resultater i immunoassays af meconium.